ELISA試劑盒實驗因其靈敏度較高、特異性較好而廣泛應用于臨床上，但操作中的各環節對檢測效果影響較大，稍不注意，就有可能導致顯色不全、花板。

問題主要集中在這幾個方面：選材、加樣、孵育、洗板、顯色、終止、讀板。問題及解決方案具體解析如下：

選材

選擇質量優良的檢測試劑，操作前將試劑在室溫下平衡 30-60 分鐘。

加樣

出現問題可能原因

1. 血清或血漿標本分離不好即進行加樣。

2. 手工操作中，加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長（特別是室內溫度較高時）。

3. 加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。

解決方案

1. 標本為血清：將血液先自然存放 1-2 小時后，再用 3000 rmp 離心 15 分鐘；標本為血漿：必須使用含抗凝劑的血液標本收集管，采血后必須立即顛倒采血管混合 5-10 次，放置一段時間后，3000 rpm 離心 15 分鐘；若在幾天內檢測，可放在 2-8℃冰箱中，若要貯存，則置于 -20℃的低溫冰箱內。

2. 加樣后及時放入孵箱。

3. 加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。

4. 如果采用 AT 或其他全自動加樣，選擇 FAME 或其他后處理儀器加酶試劑。

5. 標本較多時，請分批操作。

孵育

出現問題可能原因

1. 孵育時未貼封片或加蓋，使標本或稀釋液蒸發，吸附于孔壁，難于清洗*。

2. 孵育時間人為延長，導致非特異性結合緊附于反應孔周圍，難以清洗*。

解決方案

1. 貼封片或加蓋；

2. 按說明步驟嚴格控制操作時間。

洗板

出現問題可能原因

1. 采用手工洗板，孔與孔之間液體交叉。

2. 采用半自動洗板機洗板時，洗液量不足，導致洗板不*；洗板針堵塞，抽吸不*；洗板不暢，導致洗板效果差。

3. 反應板過多造成洗板等待時間長。

解決方案

1. 保證洗液注滿各孔，洗板針暢通，洗完板后在吸水紙（選擇干凈、無或少塵的吸水材料）上輕輕拍干。

2. 合理安排，或多用幾臺洗板機。

顯色

出現問題可能原因

1. 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑。

2. 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。

解決方案

1. 顯色劑盡量在臨用前配制，堅持不用過期顯色劑，肉眼可見淺藍色的 TMB 顯色劑不用。

2. 加樣時保持顯色劑不外流。

3. A、B 液應避免接觸金屬器械。

終止

出現問題可能原因

加終止液時產生較多氣泡，導致假陽性增加。

解決方案

加終止液時應避免產生氣泡。

讀板

出現問題可能原因

讀板時板底不清潔。

解決方案

應保證酶標板清潔。