【預期用途】

僅供科研使用，本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關液體樣本中蛋白磷酸化酶2A（PP2A）活性。

【檢測原理】

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人蛋白磷酸化酶2A（PP2A）水平。用純化的人蛋白磷酸化酶2A（PP2A）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入蛋白磷酸化酶2A（PP2A），再與HRP標記的蛋白磷酸化酶2A（PP2A）抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的蛋白磷酸化酶2A（PP2A）呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中人蛋白磷酸化酶2A（PP2A）活性濃度。

【產(chǎn)品性能】

1、物理性能

試劑盒的各液體組分應澄清透明、無沉淀或者絮狀物。微孔板鋁箔袋應真空包裝，無破損漏氣(如有漏氣，不影響使用）。

2、劑量反應曲線線性

標準品劑量反應曲線相關系數(shù)r值，大于等于0.9900。

3、檢測范圍

1.2U/L -45U/L。

4、靈敏度

檢出劑量最小不能小于小于0.3U/L 。

5、精密度

精密度用樣品測定值的變異系數(shù)CV 表示。CV（%） = SD/mean×100

批內(nèi)差：取同批次試劑盒對低、中、高值定值樣本進行定量檢測，每份樣本連續(xù)測定20 次，分別計算不同濃度樣本的平均值及SD 值。

批間差：選取3 個不同批次的試劑盒分別對低、中、高值定值樣本進行定量測定，每個樣本使用同一試劑盒重復測定10 次，分別計算不同濃度樣本的平均值及SD 值。

批內(nèi)差： CV<5.9%

批間差： CV<8.1%

6、回收率

7、線性

8、特異性

9、穩(wěn)定性

【操作步驟】

1.標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

2.加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。  

4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用。

5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。

7.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

8.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。

9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10-20分鐘。

10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。

11.測定：以空白孔調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。